Protoplast Isolation from the Mycelium of Pleurotus ostreatus and Cordyceps militari
Keywords:
Medicinal mushroom, Oyster mushroom, ProtoplastAbstract
This study aimed to investigate the optimal conditions for the protoplast isolation of Pleurotus ostreatus and Cordyceps militaris. The factors that were optimized included mycelium age, formula of mixed enzymes solution, mannitol concentration for osmotic stabilization, digestion temperature and duration. The results demonstrated that the optimal conditions for P. ostreatus were 4-day-old mycelium, digested for 6 hours at 25±2 °C with an enzyme solution consisting of 1.0% Cellulase Onozuka R-10, 1.5% driselase 1.5% lysing enzyme, and 1.0% Macerozme R-10 dissolved in 0.6 M mannitol. These conditions yielded the highest number of protoplasts, with 6.25x105 cells/mL. For C. militaris, a similar enzyme solution was suitable for the digestion of 5-day-old mycelium at 30 °C for 3 hours, yielding the highest number of protoplasts at 6.25x105 cells/mL.
References
คำนูณ กาญจนภูมิ. 2545. เทคโนโลยีโปรโตพลาสต์ของพืช. สำนักพิมพ์แห่งจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, กรุงเทพฯ. 116 หน้า.
ธัญญา ทะพิงค์แก, มงคล ยะไชย และ วรรณพร ทะพิงค์แก. 2561. ผลของอุณหภูมิในการเพาะเลี้ยงต่อผลผลิต และปริมาณสารคอร์ดิซิปินในเห็ดถั่งเช่าสีทอง. วารสารวิทยาศาสตร์เกษตร 49: 172-174.
สกุลรัตน์ สุวรรณโณ. 2553. การแยกและการเพาะเลี้ยงโปรโตพลาสต์จากเซลล์ซัสเพนชั่นปาล์มน้ำมันพันธุ์เทเนอรา. วิทยานิพนธ์วิทยาศาสตรมหาบัณฑิตสาขาพืชศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์, สงขลา.
สมปอง เตชะโต. 2536. เทคโนโลยีชีวภาพของพืชปลูก. ภาควิชาพืชศาสตร์ คณะทรัพยากรธรรมชาติ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์, สงขลา. 201 หน้า.
สาวิตรี ลิ่มทอง. 2549. ยีสต์: ความหลากหลายและเทคโนโลยีชีวภาพ. สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. กรุงเทพฯ611 หน้า.
Aswini, L., N. Arunagirinathan and M. Kavitha. 2014. Strain improvement of Pleurotus species by protoplast fusion. International Journal of Advancements in Research & Technology 3: 32-38.
Chang, S.T. and P.G. Miles. 2004. Mushrooms-Cultivation, Nutritional Value, Medicinal Effect, and Environmental Impact. 2nd Edition. CRC Press. Boca Raton. 480 p.
Das, S.K., M. Masuda, A. Sakurai and M. Sakukabara. 2010. Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: Current state and prospects. Fitoterapia 81: 961-968.
Davey, M.R., P. Anthony, J.B. Power and K.C. Lowe. 2005. Plant protoplast: status and biotechnological perspectives. Biotechnology Advances 23: 131-171.
Djajanegara, I. and A. Masduki. 2010. Protoplast fusion between white and brown oyster mushrooms. The Indonesian Journal of Agricultural Science 11:16-23.
Eyini, M., K. Rajkumar and P. Balaji 2006. Isolation, regeneration and PEG-induced fusion of protoplasts of Pleurotus pulmonarius and Pleurotus florida. Mycobiology 34: 73-78.
Feng, H., Z. Sun, H. Li, P. Qin, C. Tang, R. Fu, Y. Liu, P. Li and A. Zheng. 2012. Preparation, purification and regeneration optimizing research of protoplasts from Rhizoctonia solani. African Journal of Microbiology Research 6: 3222-3230.
Fox, H.M. 1991. Genetic studies on the edible mushrooms Lentinula edodes and Pleurotus species. Ph.D. Thesis. University of Nottingham.
Kim, B. K., J. H. Kang, M. Jin, H. N. Kim, M. J. Shim and E. C. Choi. 2000. Mycelial protoplast isolation and regeneration in Lentinus lepideus. Life Sciences 66: 1359-1367.
Lalithakumari, D. 1996. Protoplasts - A biotechnological tool for plant pathological studies. Indian Phytopathology 49: 199-212.
Ramamoorthy, V., L. Govindaraj, M. Dhanasekaran, S. Vetrivel, K.K. Kumar and E. Ebenezar. 2015. Combination of driselase and lysing enzyme in one molar potassium chloride is effective for the production of protoplasts from germinated conidia of Fusarium verticillioides. Journal of Microbiological Methods 111: 127-134.
Regula, J. and M. Siwulski. 2007. Dried Shitake (Lentinulla edodes) and Oyster (Pleurotus ostreatus) mushrooms as a good source of nutrient. Acta Scientiarum Polonorum Technologia Alimentaria 6: 135-142.
Ren, N., J. Liu, D. Yanga, X. Liu, J. Zhou and Y. Peng. 2018. Preparation and regeneration of protoplasts from the ethylvincamine producing fungus CH1 (Geomyces sp.). Natural Product Communications 13: 145-148.
Winkler, D. 2008. Yartsa Gunbu (Cordyceps sinensis) and the fungal commodification of Tibet’s rural economy. Economic Botany 62: 291-305.
Zhao, J. and S. T. Chang. 1993. Monokaryotization by protoplasting heterothallic species of edible mushrooms. World Journal Microbiology Biotechnology 9: 538-543.
